兔肾小管上皮细胞

兔肾小管上皮细胞原代分离培养

【简介】

肾小管上皮细胞是肾小管间质的主要细胞，它具有非常旺盛的代谢活性和潜在的增殖能力，并且能够分泌多种细胞因子，所以，肾小管上皮细胞损伤，是引起急性肾衰竭的直接原因。肾小管上皮细胞来自于肾立方上皮细胞，比中性粒细胞要大，核比较大、呈圆形，核膜较厚，核突出容易见。在尿液中容易变形，大多呈圆形或多边形，所以又称多边细胞；

【材料】

75%酒精、双抗PBS、含10%FBS的DMEM/F12培养液、0.1%Ⅳ型胶原酶、0.05%胰蛋白酶、剪刀、镊子、培养皿；

【方法】

1）兔处死后75%酒精浸泡3min，开腹腔取肾脏置于预冷的PBS中，去除外膜，将肾皮质剪碎至1mm³大小,洗去血液及尿液；

2）组织沉淀1：3比例加胰酶和Ⅳ型胶原酶混合37°消化20min, 静置2min取上清，未消化组织加消化液继续消化20min，静置后取上清，重复至无组织；

3）上清加含血清培液稀释后经100目（150-165um）筛网、200目（70-75um）筛网过滤,收集200目筛网上物,1300R/5min离心后去上清；

4）重悬沉淀600R/3min离心两次弃上清，纯化肾小管；

5)加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代培养48h首次换液，后面2d换液一次；

【培养】

上皮专用培养液

【鉴定】

阳性：细胞角蛋白18（Cytokeratin 18）、ZO-1、肾小管上皮细胞标志蛋白Villin、AQP1和SGLT2，采用细胞角蛋白18（Cytokeratin 18）；

阴性：波形蛋白Vimentin；